|
氯霉素是一种广谱抗生素，曾作为兽药用于家畜疾病的治疗和预防。氯霉素具有导致人再生障碍性贫血的副作用，欧美等发达国家已相继禁止使用，我国农业部第235号文规定动物性食品中氯霉素残留限量为不得检出。然而由于氯霉素抑菌效果好且价格低廉，目前我国仍有部分养殖主将氯霉素用于治疗家畜、禽类疾病。为了保障人民健康及扩大与世界各国食品贸易往来，必须对氯霉素残留进行监控。
1. 适用范围：本方法适用于水产养殖水、水产运输水和水产（鱼、虾）组织中氯霉素的快速筛查检测。
水样（养殖水或运输水）：检出限3.0 μg/kg；组织样本（鱼、虾肉类）：检出限0.2 μg/kg
2、产品组成
|
名称
|
数量
|
名称
|
数量
|
|
检测卡（含酶标孔）
|
10条
|
样品复溶液
|
1瓶
|
|
提取剂
|
10瓶
|
正己烷
|
1瓶
|
|
说明书
|
1份
|
|
|
3.检测原理：氯霉素快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的氯霉素在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上氯霉素－BSA偶联物的结合。如果样本中氯霉素含量大于0.2 μg/kg(水样3μg/kg)，检测线T比质控线C浅或者T线不显色，结果为阳性。反之，检测线T显色与质控线C线相当或者比C线深，结果为阴性。
4、样品收集及处理
鱼、虾等水产收集于干净的容器或自封袋中；若不能及时送检，样本应该去除脂肪，用剪刀剪碎或者用绞肉机搅碎后，分装保存于-20℃下，忌反复冻融。
5、样品处理
A、水产养殖水或水产运输水：不需要处理，直接作为待测液。
B、鱼、虾等：
⑴ 取一定量的水产样本去除脂肪后，用绞肉机搅碎成肉泥状；
⑵ 称取5 g已处理待测样品于50 mL离心管中；
⑶ 加入1瓶提取剂，剧烈震荡混匀3分钟；
⑷ 4000转离心5分钟，取上层液4mL至10 mL离心管中，于65℃下，利用氮气或空气将溶剂吹干；
⑸ 移液器准确加入200 µL样品复溶液及加入300 mL正己烷复溶，震荡混匀1分钟；
⑹ 4000转离心1分钟，至少取100 µL下层液待测。
6、检测步骤：
A、养殖水或运输水测试（简易方法）
l 打开铝箔袋，取出检测卡和酶标孔。
l 用吸管吸取水产养殖水或水产运输水或离心管中的上清液适量，滴加5滴到酶标孔中，弃去吸管中余下的样液，用吸管在酶标孔中反复吹打至酶标孔内红色物资完全溶解，等待反应10分钟。
l 将检测卡平放，吸取酶标孔中全部溶液逐滴加到检测卡加样孔中，加样后开始计时，4～6分钟内根据图示判定结果。其它时间判读无效。
B、组织样品测试（（鱼、虾样品处理溶液）
（1）测试前将未开封的检测卡及待检样品溶液恢复至室温（20-30℃）；
⑵ 从原包装铝箔袋中取出检测卡和酶标孔，在半小时内使用；
⑶ 用移液器吸取待检样品溶液100µL于酶标孔中，等待反应5分钟（在2分钟时，反复吹打样品溶液至孔内红色物质完全溶解）。
⑷ 将检测卡平放，用移液器吸取所有溶液滴加于加样孔中，加样后开始计时；
⑸ 反应5~8分钟后根据示意图判断结果，其他时间判读无效；
7.结果判定
阴性结果：T线比C线深，或一样深，表示样品氯霉素浓度低于其灵敏度；
阳性结果：T线比C线淡，或T线不显色，表示样品氯霉素浓度高于其灵敏度；
无效反应：如果测试结果C线未出现，表示此试剂已失效。
8. 注意事项
8.1 速测卡启封后30分钟内使用。操作时请勿触摸试纸显示区，检测时避免阳光直射及风扇直吹。避免阳光直射。
8.2 检测卡在室温下一次性使用，请勿重复使用。
8.3 本方法为筛查方法，若出现阳性结果，建议用确证方法复查。
9、保存和稳定性：4-30℃阴凉干燥处保存，不可冷冻，有效期为12个月。
|
