菌落总数快速检测片

(Aerobic count plate )

型号及包装规格：

LC01AC（24片/包） LC02AC（12片/包）

1 原理及适用范围

菌落总数是指食品样品经过处理，在一定条件下培养后所得1mL(g)检样，是最常见的微生物检测项目。菌落总数快速检测片是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在检测片上呈红色，其优点在于缩短计数时间和便于计数。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定。

执行标准：食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定（GB 4789.2）。

2 操作方法

2.1 样品处理：取样品 25 mL（g）放入含有225 mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6~7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。

2.2 接种：一般食品选2~3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。取菌落总数快速检测片置于平坦实验台面，用无菌吸管吸取1mL样品匀液均匀地滴加到纸片上，放置1-2 min使纸片完全湿润，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。

2.3 培养：将检测片叠放在一起，水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过10片。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15~24h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48h。

3 结果判读

细菌在检测片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30 CFU~300 CFU个）的检测片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（克）样品中所含的细菌菌落总数。

4 计数原则及报告方式

4.1 若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个纸片菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每毫升(或克)样品中菌落总数结果。

4.2 若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算:

·················（1）

式中：

N——样品中菌落数；

∑C——检测片上(含适宜范围菌落数的检测片)菌落数之和；

n₁——第一个适宜稀释度检测片数；

n₂——第二个适宜稀释度检测片数；

d——稀释因子(第一稀释度)。

示例：

上述数据经“四舍五入”后，表示25000或2.5×10⁴。

4.3 若所有的稀释度菌落总数均大于300 CFU，则对稀释度最高的检测片进行计数，其他检测片可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

4.4 若所有的稀释度菌落总数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

4.5 若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

4.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30 CFU~300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

4.7 菌落总数的报告

4.7.1菌落数在100 CFU以内时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

4.7.2大于或等于100 CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面的0代替位数，也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

4.7.3若检测片上一片红色无法计数时，则报告多不可计。

4.7.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

4.7.5称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。

5 附加说明

5.1菌落总数快速检测片检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达85％以上。

5.2磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15分钟，或者放入消毒碗柜中消毒。

5.3生理盐水的配制与灭菌：取8.5g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到1000mL蒸馏水或纯净水中，先煮开后进行分装，取9mL加入到10mL洁净试管中，盖上硅橡胶塞或棉纱塞，放入消毒柜中消毒。

5.4注意使用过的检测板上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。

6生产日期见包装封口处

7保存条件

本产品需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。